K1-Fluo 激光共聚焦顯微鏡在細胞骨架研究中的應用

隨著生物學的發(fā)展，對觀察細胞形態(tài)所使用的儀器精度也越來越高，激光共聚焦顯微鏡具有高靈敏度，高分辨率，高放大率等優(yōu)點，而且它不但可以在水平方向上對標本進行測量和分析，還可以獲得清晰的三維圖像。同時它還可以處理活的樣品，不會對樣品造成化學或物理破壞，因此它在形態(tài)學，分子細胞生物學，神經(jīng)科學，藥理學，遺傳學等研究領域中成為有力的工具。

K1-Fluo 激光共聚焦顯微鏡的介紹

共聚焦顯微鏡的原理

K1-Fluo ABM 是在熒光顯微鏡的基礎上加裝了激光掃描裝置，使用405nm ,488nm , 561nm , 638nm波長的激光作為光源，并利用計算機進行圖像處理，獲得高分辨率，高質(zhì)量的圖像。K1-Fluo ABM 主要由激光發(fā)射器，掃描器，熒光顯微鏡，計算機存儲器以及處理和控制系統(tǒng)組成。通過針孔成像技術還可以對樣品進行無損傷斷層掃描，并且利用自帶的軟件自動進行三維重構(gòu)。

由于K1-Fluo 采用針孔共聚焦技術，在物鏡的焦平面上放置了一個帶有小孔的擋板，可以將焦平面以外的雜散光擋住，消除球差，并進一步消除色差。

傳統(tǒng)的光學顯微鏡使用的是場光源，標本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射的干擾，激光共聚焦顯微鏡采用點掃描技術，激光束經(jīng)照明針孔形成點光源對焦平面上進行逐點掃描，標本上被照射的熒光在探測針孔處成像，該點以外的熒光均被探測針孔擋住，因此大大提高了清晰度。在物鏡轉(zhuǎn)臺上裝上步進馬達，就可以控制物鏡上下移動，就可以獲得一張紙連續(xù)的光學切片，在利用計算機系統(tǒng)自動進行三維重建。

與此同時LSCM也是觀察活細胞動態(tài)、多重免疫熒光標記和離子熒光標記的有力工具。

K1-FluoDMB激光共聚焦顯微鏡的應用案例

微絲（MF），又稱肌動蛋白，是真核細胞中由肌動蛋白組成的高度動態(tài)的網(wǎng)絡結(jié)構(gòu)，其參與細胞內(nèi)多種生理活動，如細胞質(zhì)流動、細胞分裂、細胞顆粒的運輸、肌肉收縮等等。細胞骨架通常是通過迅速的聚合解聚來調(diào)整或改變其形態(tài)，從而在細胞中開展各種功能以及應對外界刺激時維持細胞正常的生理活動。細胞中微絲骨架的動態(tài)變化直接接受肌動蛋白結(jié)合蛋白（ABPs）的調(diào)節(jié)。ABPs通過與單體肌動蛋白或絲狀肌動蛋白結(jié)合，調(diào)節(jié)二者之間的動態(tài)平衡，進而調(diào)控微絲骨架的組織和功能。通過采用探針標記對體內(nèi)的微絲骨架進行標記再利用激光共聚焦顯微鏡進行激發(fā)熒光可以獲得可視化的圖像。正是由于發(fā)光探針結(jié)合激光共聚焦顯微鏡的使用，才使得對于細胞骨架的系統(tǒng)性研究越來越透徹，從而一步步揭開細胞骨架的奧秘。

1.細胞觀察

結(jié)論：

通過多篇文獻的反映，激光熒光共聚焦顯微鏡呈現(xiàn)一系列的優(yōu)點，比如：高清晰，高分辨率圖像的采集，無損傷連續(xù)光學切片的采集，三維圖像的重建，對感興趣區(qū)域的掃描，定位，測量等。

通過激光共聚焦顯微鏡可以獲得豐富的實驗數(shù)據(jù)，有利于支持實驗研究，而K1-Fluo自帶的分析軟件還可以對樣品進行最直觀的分析。

總而言之，我們相信，LSCM 可以開拓生命科學實時觀察活細胞的機構(gòu)和離子動態(tài)生物學變化的途徑，隨著新軟件的不斷開發(fā)以及各個學科的不斷發(fā)展和滲透，為了CLSM 必將由更廣闊的發(fā)展前景。