談談激光熒光共聚焦顯微鏡常規(guī)樣品的制備要求

　　與傳統(tǒng)顯微鏡相比，激光熒光共聚焦顯微鏡具有高分辨率，高靈敏度和高放大倍率。隨著軟件開發(fā)和應用技術的發(fā)展，激光共聚焦顯微鏡已成為形態(tài)學，分子細胞生物學，神經(jīng)科學，藥理學和遺傳學領域的新一代強大的研究工具。
 

　　一、通過激光熒光共聚焦顯微鏡進行樣品制備：
 

　　激光共聚焦顯微鏡樣品制備是檢測前的關鍵步驟。樣品需要用熒光探針(單，雙和三)標記。
 

　　標本可以是固定的或活組織，或固定或活的貼壁培養(yǎng)。細胞應在共聚焦特殊培養(yǎng)皿或蓋玻片，懸浮細胞，萼片或滴劑和蓋玻片上培養(yǎng)，覆蓋。
 

　　樣品最大厚度約1~2mm，蓋玻片厚度應小于0.17mm，滑塊厚度應在0.8~1.2mm之間，表面光滑，厚度均勻，并且沒有明顯的干擾熒光。固定樣品通常用密封片密封，通常使用通過使用pH 8.5-9的PBS制備的甘油密封。

 

　　二、常規(guī)樣品制備要求：
 

　?、比玖系倪x擇：由于激光共聚焦顯微鏡使用單波長激光作為光源，因此熒光染料的選擇應基于激光共聚焦顯微鏡的激光波長。如果同一樣品中有多種熒光染料，請盡可能考慮它們的發(fā)射波長。不要重疊并避免交叉顏色問題。
 

　?、矘悠份d體的選擇：
 

　　一般的共焦顯微鏡高倍物鏡是一種油鏡。其數(shù)值孔徑小，鏡片與樣品之間的工作距離不大于0.17mm。因此，如果觀察樣品是粘附細胞或組織切片，則可以使用普通負荷。
 

　　幻燈片和蓋玻片都可以。如果是懸浮細胞或懸浮顆粒，可以通過在專用于共聚焦顯微鏡的培養(yǎng)皿中攜帶樣品來觀察。
 

　?、趁芊馄倪x擇：如果僅需要觀察樣品一次并且不太容易淬滅熒光，則可以使用一定濃度的甘油混合物來密封膜。如果樣品需要放置一段時間并且需要多次使用，則應使用抗熒光淬火密封來減少熒光信號損失。